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原代乳腺上皮细胞条件重编程培养基说明书02.14-02.pdf
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原代乳腺上皮细胞条件重编程培养基
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PRS-BCM-CR
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使用说明
产品说明
原代乳腺上皮细胞条件重编程培养基是一种为增进乳腺原代上皮细胞体外生长而设计的完全培养基。它是一种无菌的液体混淆系统，含有目的细胞生长所必须的氨基酸、维生素、有机和无机化合物以及生长因子等。该培养基产品是基于碳酸氢盐的缓冲体系，在5% CO2/95%空气的培养箱中平衡时，pH值约为7.4。该培养基的配方，可以提供一个合适的营养情况，选择性地增进体外人乳腺原代上皮细胞的生长，实现体外培养周期短、本钱可控、操作便捷的目的。
使用说明
4℃避光生存1个月内有效。
1. 乳腺原代上皮细胞的培养
人乳腺组织经消化酶消化后，经100微米筛网过滤后计数，接种在合适的培养器皿中，加入γ射线辐照后的NIH-3T3细胞，原代细胞首次接种后2-3 天勿动（利于细胞贴壁），培养历程中若培养基颜色变黄但细胞未长满时可换半液，镜下视察细胞未长满但NIH-3T3细胞已缺乏时，适量增补γ射线辐照后的NIH-3T3细胞（一般补加初始数目的一半）。
2. 乳腺原代上皮细胞的传代
镜下视察细胞形成克隆，且汇合度达80~90%时即可传代。培养箱中取出细胞，弃旧培养液，0.05%胰酶洗涤30秒后吸尽，再加入适量TrypLE™ Express酶(Gibco#12605010)，37℃孵育，10-20 min后拿出轻拍培养瓶/板侧面，显微镜下视察细胞消化情况；待消化至细胞变圆并开始脱落时用含10%胎牛血清的DMEM培养基终止消化，并将细胞转移至离心管中，300g，5 min离心；弃上清，以1-2 mL本细胞培养基产品重悬细胞，活细胞计数，将细胞悬液按适合的细胞密度接种于培养瓶/板。之后，加入γ射线辐照后的NIH-3T3细胞，在培养板/孔中补加乳腺原代上皮细胞培养基至所需体积，轻轻摇晃混匀，外貌消毒后置培养箱，37 ℃ 、5 % CO2条件培养。其他办法同上。
要害词:
原代乳腺癌条件重编程培养基
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